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eppendorf艾本德移液器各型号移液实战大比拼

发布时间:2020-10-09

      光说不练假把式,今天小编的实验室里就以常用的细胞活性实验为例,对 12 道手动移液器、 12 道电动移液器和 epMotion 96 半自动移液工作站在细胞实验中的移液效果进行比较,让我们一起看看eppendorf艾本德移液器各型号的移液实力!

 

    从左到右依次是本次的参赛选手 epMotion 96 半自动移液工作站、Reference 2 手动移液器和 Xplorer 电动移液器。

 

实验原理

细胞活性实验用于测量某种药物或某种处理对细胞活性的影响。其步骤包括细胞接种、加药处理以及试剂检测结果三部分。在此次实验中,我们选用星孢菌素 (staurosporine,STS) 来对 HepG2 细胞进行处理。星孢菌素可以阻止 ATP 与激酶的结合,影响细胞的激酶系统,从而造成细胞毒性。

 

专长"棒打鸳鸯"的星孢菌素结构式

 

而检测细胞活力则使用 CellTiter-Blue 试剂盒,其原理是在细胞中加入刃天青(Resazurin)。活细胞可以将刃天青代谢为试卤灵(Resorufin),利用 535 nm 波长的光激活并测量试卤灵发出的 595 nm 荧光强度,检测细胞中试卤灵的含量,就可以得知经药物处理过后的细胞活性状态。

 

活细胞可将刃天青代谢为试卤灵

 

实验过程

我们用 epMotion 96、电动多道移液器和手动多道移液器三种移液设备分别接种 3 96 孔板,每孔接种 10000 HepG2 细胞,培养 24 小时后加入 1 nM 20 μM 不等的星孢菌素并培养细胞 48 小时后按照 CellTiter-Blue 试剂盒配方加入试剂,300 rpm 混匀 1 分钟后在培养箱中培养 2 小时。

 

实验结果

我们来看看三组实验结果的信号质量。我们从信噪比(S/B, signal-to-background ratio)和 Z 因子两个角度来进行比较。

 

信噪比是将测得信号值与背景荧光值进行比较,信噪比越高说明测得信号相较于背景越“脱颖而出”,实验方式更加完美。

 

Z 因子利用阳性对照组 ( p ) 和阴性对照组 ( n ) 的平均值和标准差来评价实验方法的鲁棒性(Robustness),即分析方法和数据的稳定性。Z 因子越接近 1 说明实验方法越稳定和有效,当 Z 因子超过 0.5 时可以认为实验方法很有效。

 

Z 因子的计算方法

 

从下表的实验结果中我们可以看到,使用 epMotion 96 所得到的细胞数据信噪比最高,而手动多道移液器的信噪比最低。

 

Z 因子的结果也是同样,epMotion 96 和手动多道移液器的表现不分伯仲,但使用手动多道移液器的实验组则不尽如人意,甚至有一块孔板出现 Z 因子<0.5 的情况。

 

 三种移液设备分别测试所得的信噪比和 Z 因子数值

 

接下来,让我们对比一下三组实验的可重复性。

 

在同一块细胞培养板中,每个孔之间的变异系数值(CV)体现孔间差异大小。计算 CV 值发现,无论是孔间 CV 值还是板间 CV 值,使用 epMotion 96 半自动移液工作站加液时的 CV 值更低,可重复性依然稳居第一宝座。

 

epMotion 96 得到数据的板内和板间的变异系数都表现良好

 

epMotion 96 在信号强度、信号的稳定性以及实验结果可重复性上都表现良好,综合起来,使用epMotion 96 可以拟合得到最好的曲线。epMotion 96 得到的数据每浓度梯度的标准差都更小,而手动多道移液器则有更大的标准差,部分浓度的数据也偏离了拟合曲线。

eppendorf艾本德移液器

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